蛋白消化率测定
1.试剂和溶液配制
2g/l胃蛋白酶溶液的配制:⑴移取6.1ml浓盐酸,加蒸馏水稀释至1000ml;⑵将上述稀盐酸加热升温至42~45℃,取下,然后加入2g活性为1:10000生化级胃蛋白酶,轻轻地搅动,使其溶解。
2.配制注意事项:
⑴所用的胃蛋白酶必须为生化级,如果有条件的,最好对其活性进行实测。如果其活性为1:3000或其他规格,应按照活性比例,相应增加或减少酶的用量,使胃蛋白酶溶液中胃蛋白酶的活性为20IU/ml.因为胃蛋白酶溶液中酶活性的高低直接影响消化率的高低。如果与标准偏离,测定结果将无可比性,失去参考价值。⑵溶液一定要现用现配,避免配制时过热,注意勿在加热板或电炉上直接加热胃蛋白酶溶液,否则会使沉于烧杯底部的酶直接局部过热而失活。
3.测定步骤:
称取试样1g(精准至0.0001g)于300ml具塞三角瓶在中,准确加入42~45℃的2g/l胃蛋白酶溶液150ml,加塞,置于摇床,45℃条件下消化16h。消化后残渣用滤纸过滤,并用蒸馏水洗净滤纸上的未消化残渣,然后将未消化残渣连同滤纸一起转入凯氏消化管,按照凯氏定氮方法测定粗蛋白质含量。同时测定样品中粗蛋白。根据样品中粗蛋白含量与未消化残渣中粗蛋白质含量之差与样品中粗蛋白含量的比值计算得出体外消化率的结果。
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