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人血清TIMP-1酶联免疫测定试剂盒操作说明书
人血清TIMP-1酶联免疫测定试剂盒操作说明书
简介
MMP（基质金属蛋白酶）是最重要的胶原降解酶，而TIMP-1（基质金属蛋白酶组织抑制物）能与MMP非共价结合并导致后者失活。肝纤维化时TIMP-1生成增加系导致纤维增生的重要原因之一。有人对268例肝病患者进行检测，发现TIMP-1水平较正常人明显升高，且与PIIIP、IV型胶原密切相关。因此，检测血清中的TIMP-1式诊断肝纤维化一个重要指标。
本测定试剂盒利用双抗体夹心原理，定量测定血清中TIMP-1含量，具有快速、简便、精确等优点。
试剂盒组成
1. 包被条板：一块
2. 标准品（冻干粉，100ng/ml）：二管，使用前每管中加入200ul蒸馏水溶解后即可。
3. 样品稀释液：一瓶
4. 第一抗体工作液：一瓶
5. 酶标抗体工作液：一瓶
6. 浓缩洗涤液（用时1:20稀释）：一瓶
7. 底物缓冲液：一瓶(使用前每5ML缓冲液中加入OPD片一片，即为底物工作液)
8. 终止液：一瓶
9. 坐标纸：一张
10. OPD片：三片
测定
1. 建立标准曲线：设标准孔八孔，每孔中各加入样品稀释液100UL，第一孔加标准品100UL，混匀后用加样器吸出100UL，移至第二孔。如此反复作对倍稀释至第七孔，最后，从第七孔中吸出100UL弃去，使之体积均为100UL。第八孔为空白对照。
2. 加样：待测品孔每孔中各加入样品稀释液100UL，血清标本2ul。（即将标本进行1:51稀释）
3. 将反应板充分混匀后置37℃温箱，120分钟。
4. 倾去液体，用洗涤液洗4-5次，拍干。
5. 每孔中加入第一抗体工作液50ul。
6. 将反应板充分混匀后置37℃温箱，60分钟。
7. 倾去液体，用洗涤液洗4~5次，拍干。
8. 每孔加酶标抗体工作液100ul，置37 ℃温箱，60分钟。
9. 倾去液体，用洗涤液洗4-5次，拍干。
10. 每孔中加入底物工作液100UL，置37 ℃暗处5-10分钟。
11. 每孔加终止液一滴，立即在酶标仪波长492nm处测OD值。
测定结果
1. 各测定孔OD值减空白对照孔（0ng/ml）OD值，为测试实际OD值。
2. 以标准品50、25、12.5、6.25、3.13、1.56、0.78、0 ng/ml之OD值在半对数纸上作图，以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，画出标准曲线。
3. 根据每个测定样品的实际OD值在该曲线图上查得各自含量（ng/ml）。（标本所得结果还须乘以稀释倍数51方为最后结果）
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