设为首页 添加收藏
 
 
首 页 公司简介 产品展示 最新动态 技术支持 自主研发 诚聘英才 联系我们 在线服务
 
 
 
 
   技术资料
DNA提取
蛋白消化率测定
细胞因子
免疫试剂说明书
技术资料
全部技术资料
您当前位置:首页 > 技术资料 > 全部技术资料
 
人血管内皮细胞粘附因子-1定量酶联检测试剂盒


人血管内皮细胞粘附因子-1定量酶联检测试剂盒
使用说明书
【原理】
本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗人sVCAM-1单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的人sVCAM-1与单抗结合,加入生物素化的抗人sVCAM-1抗体,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,加入酶底物OPD,出现黄色,加终止液硫酸,颜色变深,在492nm处测OD值,人sVCAM-1浓度与OD值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中人sVCAM-1浓度。
【试剂盒组成】
1.        酶标板:一块(96孔/48孔),已包被抗人sVCAM-1单抗。
2.        样品稀释液:三瓶/二瓶(10ml /瓶)
3.        第一抗体工作液:一瓶(5.5ml /2.7ml)
4.        酶标抗体工作液:一瓶(10.5ml/5.5ml)
5.        底物稀释液:一瓶(15ml/10.5ml)
6.        终止液:一瓶(6ml/3ml)
7.        洗涤液(20 x):一瓶(50ml/25ml)
8.        标准品(冻干粉,256 ng/ml):二管/一管
9.        OPD片:三片/二片
10.   坐标纸:一张
11.   封板纸:一张
样品的准备和保存
样品如果不立即分析,应分装后冷冻保存,且避免反复冻融。
1.      血清:用干净试管收集血液,室温凝固30分钟,离心1000×g 15分钟,收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
2.      血浆:采用EDTA抗凝,抽血后30分钟内离心1000×g 15分钟。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
3.      细胞培养、组织匀浆、体液:离心去除沉淀,立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
【试剂的准备】
1.        标准品液配制:使用前每管中加入蒸馏水800ul溶解后即可。
2.        标本的稀释:在自备的容器(如尖底离心管)中加入200ul样品稀释液,再吸取5ul待测标本加入到样品稀释液中,混匀,即为141稀释。
3.        洗涤液:用重蒸水1:20稀释
4.        底物工作液配制:显色前5-10分钟将OPD片放入底物稀释液中溶解,每片加液5ml。
【检测程序】
1.        实验前20分钟从冰箱中取出试剂盒,以平衡至室温(20-25℃)。
2.        取出所需数量的板条,其余密封放回4℃。
3.        建立标准曲线:设标准孔8孔,每孔中各加入样品稀释液100ul,第一孔加标准品100ul,混匀后用加样器吸出100ul,移至第二孔。如此反复作对倍稀释至第七孔,最后,从第七孔中吸出100ul弃去,使之体积均为100ul。第八孔为空白对照。
4.        加样:待测品孔每孔加入已做41倍稀释的标本100ul
5.        每孔中加入第一抗体工作液50ul。
6.        将反应板充分混匀后置37℃ 60分钟。
7.        洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。
8.        每孔加酶标抗体工作液100ul。
9.        将反应板置37 ℃30分钟。
10.   洗板:同前。
11.   每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗处反应5-10分钟。
12.   每孔加入50ul终止液混匀。
13.   在492nm处测吸光值。(应尽快,时间过长可能导致本底偏高)
【结果计算与判断】
1.        所有OD值都应减除空白值后再行计算。
2.        以标准品128、64、32、16、8、4、2、0 ng/ml之OD值在半对数纸上作图,画出标准曲线。将浓度作为X轴(对数轴),OD值作为Y轴(线性轴)。曲线应为一光滑曲线。
3.        根据样品OD值在该曲线图上查出相应人sVCAM-1含量。(此时所查出的sVCAM-1量为41倍稀释后的浓度值,因此还须再乘以41,即为sVCAM-1浓度值。)
【注意事项】
1.        以上标准孔及待查样品均建议做复孔,每次测定应同时制作标准曲线。
2.        底物工作液应现配现用,若溶液颜色发黄则已失效,弃去。
3.        本试剂盒取出的试剂在室温条件下使用,溶液应轻轻摇匀后使用。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,这属于正常现象,加热使结晶完全溶解后再配制。
4.        本试剂盒含2M硫酸,不要将它与含叠氮化钠的废物混在一起。
5.        板条开封后剩余板条要再封好,保持板条干燥。
6.        不同批号的试剂盒组份不能混用。
7.        正确拿酶标板:不要接触板的底部,否则会影响读数。
【贮存】
本试剂盒宜置-20℃冷冻,可保存半年。若试剂盒开封后短期内做完(一个月内),可置4℃冷藏保存。
【性能参数】
灵敏度:最小可测人sVCAM-1达1 ng/ml。
重复性:板内变异系数<10%。
    板间变异系数<15%
 
 

版权所有:北京欣源佳和生物科技有限公司 Copyright@2005-2021 By www.xyjhtech.com
公司地址:北京市海淀区北太平庄路甲1号集贤物业308室 电话::010-62388118 / 62076380 | 邮箱:master@xyjhtech.com
友情提示:严禁以任何形式的复制或抄袭 违者必究