设为首页
添加收藏
首 页
公司简介
产品展示
最新动态
技术支持
自主研发
诚聘英才
联系我们
在线服务
技术资料
DNA提取
蛋白消化率测定
细胞因子
免疫试剂说明书
技术资料
全部技术资料
您当前位置:首页 > 技术资料 > 全部技术资料
琼脂糖凝胶纯化回收
琼脂糖凝胶纯化回收
问题与解决方法
问题
评论与建议
核酸产量低
或者纯度不高
*试剂盒储存在非最佳条件
-
建议:
收到试剂盒后总是存放在室温(15℃-20℃)。
*缓冲液或者试剂暴露于减少它们有效性的条件下
-
建议:
储存在室温(15℃-20℃),每次用完后立刻盖紧盖子,以免溶液蒸发,pH改变和污染。
*漂洗液WB中忘记加无水乙醇
-
建议:第一次实验时,在漂洗液
WB
中加入指定量无水乙醇。
*试剂和要回收溶液如PCR产物没有充分混匀
-
建议:
加入每个试剂后都要充分混匀。
洗脱后
回收率低
*使用了非最佳的洗脱液,洗脱液的高pH非常重要
-
建议:
不要用水洗脱,用试剂盒带的洗脱液EB.。
回收后
DNA
下游酶切不能
切开或者
酶切不完全
*忘记做步骤9,乙醇抑制了酶切反应
-
建议:
做步骤9,然后空气中晾几分钟,让残留乙醇挥发。
*一些硅基质膜成分一起洗脱下来,抑制了酶切反应
-
建议:
将洗脱的回收DNA溶液13,000rpm再离心一分钟,小心取上清使用,
纯化的
DNA
产物
OD
260
数值异常偏高
*一些硅基质膜成分一起洗脱下来,干扰了分光光度计读数
-
建议:
将洗脱的回收DNA溶液13,000rpm再离心一分钟,小心取上清使用。
洗脱液中
不含
DNA
*在初始处理材料中没有PCR产物
-
建议:
开始回收前,用琼脂糖凝胶/EB电泳检测PCR产物。
回收后
DNA
的浓度太低
*起始的处理材料中DNA含量太低
-
建议:
加大处理量和减少洗脱液的体积,但注意不要少于30μl。
*回收的片段小于100bp或者大于10kb
-
建议:
片段小于100bp或者大于10kb回收效率都会迅速降低,可尝试提高起始处理量。
回收产量不高
*洗脱不完全
-
建议:
可使用2次洗脱缓冲液EB洗脱(每次30μl),合并两次洗脱液。
版权所有:北京欣源佳和生物科技有限公司 Copyright@2005-2021 By www.xyjhtech.com
公司地址:北京市海淀区北太平庄路甲1号集贤物业308室 电话::010-62388118 / 62076380 | 邮箱:master@xyjhtech.com
友情提示:严禁以任何形式的复制或抄袭 违者必究