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组织/细胞基因组DNA提取
组织
/
细胞基因组
DNA
提取
◆ 问题与解决方法
问题
评论与建议
DNA
产量低
*组织块太大,蛋白酶K消化不完全
-
建议:
液氮研磨或者尽量将组织切成小块,或者延长蛋白酶K消化时间至过夜或者在原有消化基础上另加20μl蛋白酶K消化1-2小时。
*蛋白酶K失效了
-
建议:
收到蛋白酶K后,按照每次使用量分装冻存,避免反复冻融。
*裂解不完全或者和异丙醇没有充分混匀
-
建议:
加入结合液后,和加入蛋白酶K后立即吹打或者涡旋混匀;加入异丙醇后立即吹打或者涡旋混匀才加入吸附柱,如果太粘稠必须涡旋振荡15秒充分混匀。
组织
DNA
降解了
*组织中核酸酶活性导致降解
-
建议:
样品处理前妥善保存在-20℃,处理量不要过量。
未提取到
DNA
*漂洗液WB中忘记加无水乙醇
-
建议:
第一次实验时,在漂洗液
WB
中加入指定量无水乙醇。
洗脱下来的
DNA
产量低
*离心柱残留有较多乙醇或者底部不慎沾有乙醇
-
建议:
确保做了步骤7,否则残留乙醇会影响洗脱效率。
*使用了水或者其它非最佳液体代替洗脱缓冲液
-
建议:
仔细阅读仔细阅读注意事项5和步骤8和只使用洗脱缓冲液EB洗脱。
A
260
吸光值
异常偏高
*一些硅基质膜成分一起洗脱下来,干扰了吸光值
-
建议:
将洗脱的基因组DNA溶液13,000rpm再离心一分钟,小心取上清使用。
DNA
下游酶切
不能切开或者
酶切不完全
*一些硅基质膜成分一起洗脱下来,抑制了酶切反应
-
建议:
将洗脱的基因组DNA溶液13,000rpm再离心一分钟,小心取上清使用。
*离心柱残留有较多乙醇或者底部不慎沾有乙醇抑制了酶切反应
-
建议:
确保做了步骤7,然后空气中晾几分钟,让残留乙醇挥发。
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