Super ECL Plus超敏发光液 描述： SuperECL Plus超敏发光液以化学荧光发光方法检测蛋白质或核酸类生物大分子。其 原理是，蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上，以第一抗体及辣根过氧化物酶HRP标 记的第二抗体结合膜上的目的蛋白，或以HRP标记的探针直接或间接结合膜上的核酸。洗 膜后用SuperECL Plus超敏发光液A液和B液等体积的混合工作液，在可见光下室温孵 育膜数分钟，将印迹膜用保鲜膜包被粘贴固定于X光片曝光暗盒。然后转入暗室将X光胶 片压在膜上曝光数秒到数分钟至数小时。显影定影后蛋白质或核酸条带可清晰显示在X光 胶片上，可用扫描仪扫描。也可不进行X光胶片曝光直接对印迹膜进行荧光CCD扫描。 SuperECL Plus超敏发光液采用采用独特的发光底物系统，检测时产生的非特异背景非常低，也特别节省抗体(一抗1:2000-1:6000，二抗1:4000-1:10000)。在暗房内，高丰度蛋白条带的荧光常常在长达10小时以上仍然肉眼可见，对X线胶片曝光1～30秒即可得到高清晰条带；低丰度蛋白条带荧光肉眼可能不易察觉，但曝光30秒至5分钟即可检测条带；极低丰度的蛋白条带荧光可允许几十分钟甚至12小时以上长时间曝光以检测目的条带。可检测少至数百个细胞的pico (10-12 ) 到femto (10-15 ) gram级的目的蛋白或核酸，特别适用于丰度极低而普通ECL发光试剂难于检测的蛋白或核酸条带。所发荧光可对X光胶片曝光，也可直接进行荧光CCD扫描。 特征：  灵敏度极高，检测10-100 fg抗原  高信噪比，背境干净  发光迅速，荧光可持续12小时  允许在日光灯下进行发光操作  特别节省抗体(一抗1:2000-1:6000，二抗1:4000-1:10000)  可用于凝胶胶内蛋白荧光检测 适用：直接或间接检测与辣根过氧化物酶HRP关联的蛋白Western Blot或核酸杂交。 组成：以100ml包装为例，含50 ml 溶液A和50 ml 溶液B。使用前混合。 储存：4 ºC避光储存1年。25 ºC室温放置数周。 使用方法: 1.    常规电泳、转膜、HRP 标记抗体或核酸探针孵育、洗膜。注意用 HRP 标记 lgG 或用一抗-链亲和素-生物素-HRP 夹法。核酸杂交膜用 HRP 标记探针杂交，洗膜。 2.    洗涤膜上的  HRP  标记二抗时，新鲜配制发光工作液：分别取等体积的溶液  A  和  B  混合，放置使之升到室温否则会减弱荧光强度。建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。 3.    用镊子取出膜，搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入并与发光工作液(0.125ml发光工作液/cm  2膜)充分接触。室温孵育 3 分钟，准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度，有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应，使用过少的发光工作液不利反应进行，也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小但勿降低发光液用量。 4.    用镊子夹起膜，搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。 5.    在  X  光胶片暗盒内面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将杂交膜贴在保鲜膜上，将保鲜膜折起来完全包裹杂交膜，去除气泡和皱褶，可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖杂交膜的保鲜膜固定在暗盒内，最好蛋白带面向上。 6.    在黑暗中放入 X 光胶片，分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。 注意事项： 1.    步骤 1-5 可在日光灯下操作；但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。 2.    长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。 3.    发光工作液孵育约 3 分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使 X 光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使 X 光胶片感光，因而弱带可曝光 1-10 小时。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL 发光和曝光。 4.    由于超敏发光液极其灵敏，强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗 1:1000-1:4000，二抗1:2000-1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致失败! 5.    一些保鲜膜包裹印迹膜时会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。 6.    NaN  3能抑制HRP活性，回收第二抗体应避免使用NaN3，如必需使用勿超过 0.01%。