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PCR产物纯化回收试剂盒
v 适用范围：
适用于PCR反应产物、酶切产物DNA片段、探针标记纯化回收，DNA样品浓缩等。
v 试剂盒组成、储存、稳定性：
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试剂盒组成 |
保存 |
50次 |
100次 |
200次 |
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结合液BB |
室温 |
30 ml |
60ml |
100 ml |
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漂洗液WB |
室温 |
15 ml 25 ml 50 ml
第一次使用前按说明加指定量乙醇 |
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洗脱缓冲液EB |
室温 |
10 ml |
15 ml |
20 ml |
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吸附柱EC |
室温 |
50个 |
100个 |
200个 |
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收集管（2ml） |
室温 |
50个 |
100个 |
200个 |
本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:
1.所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。使用前应该恢复到室温
2.储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃-25℃）进行。
3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
v 产品介绍：
在高离序盐存在的情况下，DNA片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。
v 产品特点：
1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2. 使用了优质结合液，不含传统结合液的碘化钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3. 结合液调制成为了黄颜色，便于监测pH值变化从而达到最佳结合效果，大大提高回收效率。
4. 快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。
v 注意事项
1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 结合液中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。
3. 回收纯化的DNA片段一般在100bp到40kb之间，过长、过短片段的回收效率迅速降低。
4. 回收DNA的量和起始DNA的量，洗脱体积，DNA片断大小有关。一般1-20μg， 100bp-5kb的DNA片段，回收率可达95％。
5. pH值≤7.5时，吸附膜吸附DNA的效率最高。如果待纯化产物含有碱性物质过多，造成和结合液混和后pH偏高，会导致回收率降低。混和后，如果结合液依旧保持黄色，说明pH正常；如果变成橘红色或者淡紫色，说明pH偏高，可加5-10μl 3M醋酸钠（pH5.2）将pH值调到5-7（黄色）。
6. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA， 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱， 但应该确保pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱，DNA片段应该保存在－20℃。DNA片段如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
v 操作步骤：
提示：第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
1. 每100μl PCR扩增后体系或者酶切后体系加入500μl结合液BB，充分混匀。（如果初始体系小于100μl，请事先用双蒸水调整至100μl）。
2. 将上一步所得溶液加入吸附柱EC中（吸附柱放入收集管中），室温放置1分钟，12,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。
3. 加入700μl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。
4.加入500μl漂洗液WB，12,000rpm离心30秒，弃掉废液。
5. 将吸附柱EC放回空收集管中，12,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
6. 取出吸附柱EC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加50μl洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中加热效果更好），室温放置2分钟，12,000rpm 离心1分钟。如果需要较多量DNA，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，离心1分钟。
洗脱体积越大，洗脱效率越高。如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于25μl，体积过小降DNA洗脱效率，减少产量。 |
