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新型植物基因组DNA快速提取试剂盒
v 适用范围：
适用于快速提取植物基因组DNA
v 试剂盒组成、储存、稳定性：
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试剂盒组成 |
保存 |
50次 |
100次 |
200次 |
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RNase A(10mg/ml) |
-20℃ |
250 μl |
500 μl |
1 ml |
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缓冲液AP1 |
室温 |
25 ml |
50 ml |
100 ml |
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缓冲液AP2 |
室温 |
10 ml |
20 ml |
40 ml |
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缓冲液AP3/E |
室温 |
15 ml 25 ml 50 ml
第一次使用前按说明加指定量乙醇 |
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漂洗液WB |
室温 |
15 ml 25ml 50ml
第一次使用前按说明加指定量乙醇 |
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洗脱缓冲液EB |
室温 |
15 ml |
20 ml |
40 ml |
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吸附柱AC |
室温 |
50个 |
100个 |
200个 |
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收集管（2ml） |
室温 |
50个 |
100个 |
200个 |
本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:
1.裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀，可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解（AP3加入乙醇前可加热，加入乙醇后不可加热），恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
v产品介绍：
该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。
新鲜或干燥的植物组织（细胞）磨碎后经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 进一步将多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
v 产品特点：
1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2. 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
3. 快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。
4.数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。
v注意事项
1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13，000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2.开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。
3.缓冲液AP3/E中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4.不同来源的植物组织材料中提取DNA 的量会有差异，一般100mg新鲜组织典型产量可达3-25μg。
5.洗脱液EB不含有螯合剂EDTA， 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱， 但应该确保pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在－20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱 （10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
v 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
提示：
ð 第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
ð 第一次使用前请先在缓冲液AP3/E中加入指定量无水乙醇!
1. 取适量植物组织（新鲜组织100 mg 或干重组织20 mg）在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。
2. 转移细粉到一个1.5ml离心管，不要解冻，加入400μl缓冲液AP1 和4μl RNase A(10 mg/ml)，旋涡振荡，充分混匀帮助裂解。
如果组织裂解困难，可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。大多数情况下不需要离心去除未完全裂解的组织，因为后面有一个离心去除的步骤。
3. 65℃水浴10分钟，在水浴过程中颠倒离心管2-3次，混合样品。
4. 加入130 μl 缓冲液AP2，充分混匀，冰上放置5分钟， 14,000 rpm 离心5-10 分钟，小心吸取上清到一个新的1.5ml离心管，注意不要吸到界面物质。
5.计算上清量，加入1.5倍体积的AP3/E（请先检查是否已加入无水乙醇!），立即吹打混匀。
加入AP3/E可能会出现絮状沉淀，但不影响DNA提取。注意将AP3/E直接加入到上清并立即吹打混匀。
6. 将上一步所得混合物（包括可能出现的沉淀）加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液（先加650μl离心，弃废液，再加入剩余的溶液，再次离心）。
7. 加入700μl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm 离心30秒，弃掉废液。
8. 加入500μl漂洗液WB，12,000 rpm 离心30秒，弃掉废液。
9. 将吸附柱AC放回空收集管中，13,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
10. 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液可事先在 65-70℃水浴中预热）， 室温放置3-5分钟，12,000 rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入吸附柱中，室温放置2分钟，12,000 rpm离心1分钟。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果预计和需要产量高，可增大洗脱体积，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于50μl，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。
DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放，可以放置在－20℃ |
